LISIS DE BACTERIAL POR BACTERIÓFAGOS

OBJETIVO

Determinar la concentración de los bacteriófagos por suspensión dentro de los medios de plaquetas modificadas.

INTRODUCCIÓN

Los agentes virales que atacan a las bacterias, normalmente son llamados bacteriófagos (fagos). Son considerados una representación general natural de los virus. Así son usados como modelos para entender la replicación viral en las células hospederas-virus y su interacción. Ellos tienen una acción muy específica, los bacteriófagos pueden actuar en un medio de bacterias, dentro de una especie y de no atacar a otras en otros medios. La virulencia de los bacteriófagos lisan la célula bacteriana, esto demuestra que en los medios de cultivo, por medio de cultivos limpios o medios de agar o en zonas limpias de plaquetas. Así los virus pueden ser usados en estudios epidemiológicos para identificar medios específicos de bacterias.

Hay otros fagos que llevan a cabo ese círculo lítico dentro de la célula, más bien un ciclo lisogénico dentro de la célula hospedera, el ácido nucleico de los fagos está incorporado dentro de la célula hospedera o dentro del cromosoma, ahora lo llamaremos FAGOCITOSIS. Con esto la bacteria genera ocurrencia lítica o no ocurre lisis en ese momento, así la temperatura de los fagos es muy importante porque esto viene a ser responsable de la producción de difteria tóxica, toxina botulínica y otras toxinas en la célula hospedera, asi los fagos tienen una implicación en el desarrollo de antibióticos y su resistencia a las bacterias. El segundo estilo de vida de los bacteriófagos está descrita en la Figura 43.1

La bacteria hospedera más común usado para trabajar con bacteriófagos es la Escherichia coli  y se estudia un grupo de fagos alrededor de lo que se llama las series T, numerados de 1 hasta 7,  esto ataca a medio no móviles de E.coli. Son designados de T1, T2, T3…T7 (T por tipo).

Los fagos T tienen una forma como de espermatozoide, con una cabeza polihídrica (más o menos de 50µm de diámetro), y una cola estrecha. Su cabeza es una línea sencilla de moléculas de ácidos nucleicos alrededor de una estrecha capa de más o menos 50µm de largo, y considerado una doble hélice de cadena ADN. El DNA está estrechamente condensado en la cabeza del fago está literalmente emergido en unos tubos de proteínas y cerrado  con un cierre contráctil. Un tipo de bacteriófagos se pueden observar en la figura 43.2.

Un círculo lítico se puede describir en la Figura 43.1, el fago se adhiere a la pared celular de la bacteria con un receptor viral.

La capa proteica del fago permanece fuera de la célula, sigue un re-direccionamiento a la célula hospedera gracias al material del fago en lugar de materia celular. Los nuevos fagos se replican dentro de la bacteria, rompen la salud, salen las nuevas partículas del fago.

El nuevo virón reinyecta y subsecuentemente rompe o lisa más celular. Esta continúa siendo el ciclo de lisis reinfectantando o introduciendo visibles plaquetas en las células.

Partes de Un bacterófago

REFERENCIAS

·         MICROBIOLOGY, Chap.15. “Viruses: Morphology, Clasification, Replication”

·         MICROBIOLOGY, Chap.16, “Viruses: Cultivation Methods, Pathogenicity”.

MATERIALES

·        2 platos Petri con agar tripticasa y soya

·        10 tubos con 9ml cada uno de caldo tripticasa

·        9 pipetas esteriles de 1ml (con algodón en la boquilla)

·        muestra del bacteriófago de escherichia coli ajustado para tener un título de aproximadamente 10⁵  unidades formadoras de placa (cfu) / ml

·        trypticase - cultivo en caldo de 6 a 12 horas cepa sensible a bacteriófagos de E. coli.

PROCEDIMIENTO

Acomode 10 tubos de caldo de tripticasa por hilera en un tubo de ensayo, etiquételos del 1 al 10.

1.. Usando una precaución aséptica, transfiera 1 ml de la muestra del fago al tubo. Deseche el pippete, con una pipeta nueva mezcle las páginas y el caldo, extrayendo aproximadamente 0.5 ml de la mintura.

2. coloque una gota de E.coli en cada una de las dos placas de agar con tripticasa que se proporcionan. 

3.. invierta las placas, dibuje cinco líneas en la parte inferior de cada una, y marque las líneas numéricamente como se siembran debajo

4. Ahora retire un bucle de material del tubo I y raya esto en la superficie de la placa de agar que sigue

5. agregue 1 gota del cultivo de caldo Escheria coli a cada uno de los 10 tubos preparados para 2 tubos preparados con este procedimiento. Incubar a 35°C.