CORPÚSCULOS DE NEGRI

INVESTIGACIÓN DE CORPÚSCULOS DE NEGRI

INTRODUCCIÓN

            En el diagnóstico de laboratorio de la rabia las técnicas empleadas deben ofrecer condiciones óptimas de precisión, rápidez y economía, ya que es una enfermedad zoonótica la cual produce terrible sufrimiento a las víctimas de la infección y que además luego de la presentación de los síntomas la enfermedad resulta invariablemente fatal.

            Cumplen con éstos requisitos las siguientes técnicas:

·         Investigación microscópica de corpúsculos de Negri, que consiste en realizar Tinción de Seller a improntas de tejido encefálico sospechoso.

·         Prueba Biológica: que consiste en realizar inoculación intracerebral a ratones de 3 días de edad de una suspensión de 10-20% de material encefálico sospechoso.

·         Prueba de anticuerpos fluorescentes.

OBJETIVOS

1.    Reconocer la importancia de la tinción de Seller para el diagnóstico de la rabia.

2.    Conocer cómo se lleva a cabo la técnica

3.    Observar placas positivas a la tinción de Seller.

4.    Demostrar la importancia del cumplimiento de las normas de Bioseguridad durante el desarrollo de técnicas de diagnóstico que implican alto riesgo.

PROCEDIMIENTO

Preparación de las soluciones madres y el tinte:

a.    Solución A: a un litro de metanol absoluto añada 10 gr de azul de metileno, guarde en envase de vidrio ámbar.

b.    Solución B: a 500ml de metanol absoluto añada 5gr de fuchsina básica, deposite en envase de vidrio ámbar.

c.    La solución del tenido se prepara 2 partes de solución A más una parte de la Solución B. Se debe homogenizar amabas soluciones más no filtrarlas. Se recomienda esperar hasta 24 horas antes de su utilización.

Preparación de las Improntas:

a.    Muestras de hipocampus, corteza y cerebelo se seccionan con un bisturí.

b.    Se colocan sobre depresores cuidando de que la superficie recién cortada quede arriba.

c.    Utilizando portaobjetos completamente limpios se tocan las superficies seccionadas del tejido haciendo una ligera presión. Esto provocará que quede adherida a la superficie del portaobjetos una capa sumamente delgada de tejido de la muestra.

d.    Pueden hacerse de tres a cuatro improntas por placa.

e.    Aún húmeda la placa se cubre con el tinte.

f.     Se espera unos segundos y se enjuaga con agua común.

g.    Luego del enjuague se dejan secar.

h.    De gran importancia es el conocimiento de algunas modificaciones de ésta tinción, la más ampliamente utilizada es la tinción modificada de Lentz.

i.      El examen de las placas se realiza primero bajo objetivos de bajo poder, luego de localizadas las áreas que contienen numerosas neuronas se selecciona el objetivo de inmersión.

j.      Los corpúsculos de Negri se observan como inclusiones citoplasmáticas generalmente redondas cuyo tamaño oscila entre 0.24 y 0.27 µm de diámetro y color magenta, mientras el resto de la neurona se observará de color azul.

CONESTE LAS SIGUIENTES PREGUNTAS

1.    En que consiste la tinción modificada de Lentz.

2.    ¿Se consideran los corpúsculos de Negri patognomónicos de la enfermedad de la rabia?

3.    Mencione algunas enfermedades que podrían producir otras inclusiones citoplasmáticas acidófilas.

4.    Realice dibujos de sus observaciones.